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镍柱是一种在蛋白纯化中广泛应用的纯化柱料,属于固定化金属离子亲和色谱技术的一种。以下是详细产品介绍:镍柱纯化原理:过渡金属通过与电子供体配基上,能与金属离子相互作用的羧基或氨基的电负性元素(O,N),形成较稳定的金属螯合物。在IMAC中,一个Ni2+有六个配位位点,被含有3,4或5个电子供体基团(配位位点)的螯合物固定在吸附剂上,而剩下未被占据的位点暴露于溶液中,能与一些氨基酸的侧链或His标签的蛋白特异性结合。
在Ni柱的使用中,应当避免缓冲液中存在还原剂和螯合剂,以免Ni2+被还原而脱落。如果柱料使用太久积累了很多杂蛋白,可用EDTA将Ni2+螯合下来,再用NaOH清洗柱料后,重新螯合Ni离子,即可完成再生。
镍柱具有高分辨率、高载量、流速快、物理和化学稳定性好等优点,适用于分离能被螯合的金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His标签的重组蛋白等。同时,再生和清洗也相对简便,使其成为蛋白纯化领域的重要工具。
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